魏欣冰1 , 张岫美1 , 张 斌1 , 刘森林2 , 刘长林2
(1. 山东大学医学院药理学教研室,山东济南; 2. 邯郸森隆药业有限公司,河北邯郸)
摘 要:目的 观察安络化纤丸对实验动物免疫功能的影响。方法 测定安络化纤丸对正常和免疫功能低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素生成以及脾脏T 淋巴细胞增殖的影响。结果 安络化纤丸可增强正常小鼠和地塞米松所致免疫功能低下小鼠巨噬细胞的吞噬功能,促进血清溶血素的生成;显著提高刀豆球蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾脏T淋巴细胞增殖功能。结论 提示安络化纤丸可显著提高小鼠的免疫功能,增强机体抵抗力。
关键词: 安络化纤丸; 免疫; 吞噬功能; 溶血素; T淋巴细胞
Immunopharmacological studies of Anluohuaxian capsule
WEI Xin2bing1 , ZHANG Xiu2mei1 , ZHANGBin1 , LIU Sen2lin2 , LIU Chang2lin2
(1. Department of Pharmacology , School of Medicine , Shandong University , Jinan, China ;
2. Selong Pharmaceutical Company , Handan, China)
Abstract :Purpose To investigate the effects of Anluohuaxian capsule on the immunity in mice.Methods The influences of Anluohuaxian capsule on phagocytic function of mononuclear macrophage , formation of serum hemolysin , proliferation of T2lymphocytes in spleens both in normal and in immuno2depressed mice were deter2
mined. Results Anluohuaxian capsule could significantly enhance the phagocytosis of macrophage , increase the production of serum hemolysin and promote the proliferation of T2lymphocytes both in normal and in immuno2 depressed mice. Conclusion The results suggested that Anluohuaxian capsule could improve remarkably the immunity in mice , and strengthen the organic resistance to pathogenic factors.Key words :Anluohuaxian capsule ; immunity ; phagocytosis ; serum hemolysin ; T2lymphocyte
安络化纤丸(Anluohuaxian capsule) 的主要成分为龟板、鳖甲、生地、三七、冬虫夏草、天然牛黄等疏通类药物浓缩物,临床用于慢性肝炎,早、中期肝硬化及肝癌取得满意疗效。以往的实验证明对实验性肝损伤具有显著的保护作用[1] ,为此我们进一步探讨了本品对小鼠免疫功能的影响。
1 材 料
安络化纤丸,邯郸森隆药业有限公司, 批号:960601 ;地塞米松磷酸钠注射液,济南永宁制药厂,批号:960521 ;RPMI 1640 合成培养基、刀豆球蛋白A(ConA) , 美国Sigma 公司;3H2胸腺嘧啶核苷(3H2TdR) ,北京中国原子能科学研究院。GD 272 分光光度计,上海医用分析仪器厂;二氧化碳培养箱,美国Shelton 公司;LS23801 液体闪烁计数仪,美国Beckman 公司。昆明种或Balb/ c 纯系小鼠,体重(22 ±2) g ,山东大学实验动物中心,合格证号:鲁动质930102。
2 方法与结果
2. 1 对正常小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响[2]昆明种小鼠40 只,雌雄各半,随机分成4 组,按表1 剂量每日灌胃给药1 次,共14 d ,末次给药后1 h ,尾静脉注射1∶6. 5 中华墨汁10 ml/ kg ,注射后2-8 min 于小鼠内眦取血,分光光度计测其吸收度,结果见表1。结果显示,安络化纤丸各剂量组均能显著提高正常小鼠的吞噬指数;而廓清指数虽有升高的趋势,但无统计学意义。
2. 2 对免疫功能低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响
方法同2. 1 项,只是在实验d 7 、9、11 、13 除正常对照组外,其余各组均皮下注射2. 5 mg/ ml 地塞米松10 ml/ kg 造成小鼠免疫功能低下,结果见表2。表明安络化纤丸中、低剂量可显著增强免疫功能低下小鼠的廓清指数和吞噬指数,高剂量对此无明显影响。
表1 安络化纤丸对正常小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响(n=10,x±s)
|
组 别 |
剂 量(mg/ kg) |
廓清指数 |
吞噬指数 |
|
正常对照组 |
20ml/ kg(NS) |
0. 037 ±0. 008 |
5. 13 ±0. 48 |
|
安络化纤丸高剂量组 |
520 |
0. 042 ±0. 013 |
6. 21 ±0. 663 |
|
安络化纤丸中剂量组 |
260 |
0. 041 ±0. 009 |
5. 79 ±0. 581 |
|
安络化纤丸低剂量组 |
130 |
0. 043 ±0. 007 |
5. 95 ±0. 522 |
与正常对照组相比:1 P < 0. 05 , 2P < 0. 01 , 3P < 0. 001
表2 安络化纤丸对免疫功能低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响(n =10,x±s)
|
组 别 |
剂 量(mg/ kg) |
廓清指数 |
吞噬指数 |
|
正常对照组 |
20ml/ kg(NS) |
0. 039 ±0. 009 |
5. 21 ±0. 42 |
|
地塞米松组 |
25 |
0. 024 ±0. 0091 |
4. 17 ±0. 631 |
|
安络化纤丸高剂量组 |
520 |
0. 024 ±0. 006 |
4. 70 ±0. 50 |
|
安络化纤丸中剂量组 |
260 |
0. 033 ±0. 0082 |
5. 06 ±0. 683 |
|
安络化纤丸低剂量组 |
130 |
0. 033 ±0. 0102 |
5. 23 ±0. 893 |
与正常对照组比:1P < 0. 01 ;与地塞米松组比:2P < 0. 05 , 3P < 0. 01
2. 3 对正常小鼠血清溶血素生成的影响[3]
Balb/ c 纯系小鼠32 只,随机分成4 组,按表3剂量灌胃给药,每日1 次,共14 d ,给药d 10 ,于小鼠腹腔注射20 % 绵羊血红细胞0. 2 ml/ 只,进行初次免疫。末次给药后1 h ,取血测其吸收度,并计算半数溶血值(HC50) ,结果见表3。结果显示,安络化纤丸中、低剂量可显著升高正常小鼠的HC50 ,而高剂量的作用不明显。
表3 安络化纤丸对正常小鼠血清溶血素生成的影响(n=8,x±s)
|
组 别 |
剂 量(mg/ kg) |
HC50 |
|
正常对照组 |
20ml/ kg(NS) |
33. 67 ±14. 23 |
|
安络化纤丸高剂量组 |
520 |
33. 05 ±11. 81 |
|
安络化纤丸中剂量组 |
260 |
95. 94 ±36. 182 |
|
安络化纤丸低剂量组 |
130 |
76. 93 ±32. 161 |
与正常对照组相比:1P < 0. 05 , 2P < 0. 01
2. 4 对免疫功能低下小鼠血清溶血素生成的影响
方法同2. 3 项,用地塞米松造成小鼠免疫功能低下,结果见表4。结果显示,安络化纤丸各剂量均能显著升高免疫反应低下小鼠的HC50 。
表4 安络化纤丸对免疫低下小鼠血清溶血素生成的影响(n=8, x±s)
|
组 别 |
剂 量(mg/ kg) |
HC50 |
|
正常对照组 |
20ml/ kg(NS) |
32. 92 ±11. 59 |
|
地塞米松组 |
25 |
19. 61 ±8. 431 |
|
安络化纤丸高剂量组 |
520 |
12. 50 ±19. 302 |
|
安络化纤丸中剂量组 |
260 |
66. 10 ±34. 751 |
|
安络化纤丸低剂量组 |
130 |
86. 74 ±37. 133 |
与正常对照组比:1P < 0. 05 ;与地塞米松组比:2P < 0. 01 ,3P < 0. 05
2. 5 对正常小鼠脾脏T 淋巴细胞增殖的影响[4]
Balb/ c 纯系小鼠24 只,随机分为4 组,按表5 剂量灌胃给药每日1 次,共14 d。末次给药后1 h ,无菌制备脾淋巴细胞悬液(2 ×105/ 孔) ,置96 孔培养板中。每一样本做6 个复孔,前3 个孔加入ConA 100μl/ 孔,终浓度为5μg/ ml ,后3 孔加入RPMI 1640 培养液100 μl/ 孔。常规培养56 h ,然后每孔加入3H2TdR 18. 5 kBq ,混匀后继续培养16 h ,用多头细胞收集器收集细胞于49 型玻璃纤维滤纸上,干燥后将纸片放入盛有闪烁液5 ml 的闪烁瓶中,以β2液体闪烁计数仪测定其放射活性。以(前3 孔平均cpm - 后3 孔平均cpm) 的值代表3H2TdR 参入量。结果见表5。结果显示,安络化纤丸高、中剂量可显著升高正常小鼠的3 H2TdR 参入量和刺激指数(SI) ,而低剂量仅增加正常小鼠的3 H2TdR 参入量,对SI 无明显影响。
表5 安络化纤丸对正常小鼠脾脏T淋巴细胞增殖的影响(n=6 ,x±s)
|
组 别 |
剂 量(mg/ kg) |
3H2TdR 参入量
(cpm×103) |
SI |
|
正常对照组 |
20ml/ kg(NS) |
0. 90 ±0. 18 |
2. 30 ±0. 54 |
|
安络化纤丸高剂量组 |
520 |
1. 72 ±0. 162 |
3. 28 ±0. 501 |
|
安络化纤丸中剂量组 |
260 |
1. 49 ±0. 082 |
3. 04 ±0. 151 |
|
安络化纤丸低剂量组 |
130 |
2. 28 ±0. 352 |
2. 44 ±0. 43 |
与正常对照组相比:1 P < 0. 05 , 2P < 0. 01
2. 6 对免疫功能低下小鼠脾脏T 淋巴细胞增殖的影响
Balb/ c 纯系小鼠30 只,随机分为5 组,于d 7、9、11 、13 除正常对照组外,其余各组均用地塞米松致小鼠免疫反应低下。余同2. 5 项,结果见表6。结果显示,安络化纤丸各剂量均能显著增加免疫功能低下小鼠的3H2TdR 参入量和SI。
表6 安络化纤丸对免疫低下小鼠脾脏T淋巴细胞增殖的影响(n=6, x±s)
|
组 别 |
剂 量(mg/ kg) |
廓清指数 |
吞噬指数 |
|
正常对照组 |
20ml/ kg(NS) |
0. 88 ±0. 17 |
2. 29 ±0. 52 |
|
地塞米松组 |
25 |
0. 15 ±0. 031 |
1. 19 ±0. 031 |
|
安络化纤丸高剂量组 |
520 |
1. 17 ±1. 002 |
1. 94 ±0. 802 |
|
安络化纤丸中剂量组 |
260 |
0. 77 ±0. 253 |
2. 07 ±0. 253 |
|
安络化纤丸低剂量组 |
130 |
0. 82 ±0. 103 |
1. 95 ±0. 233 |
与正常对照组比:1P<0.001;与地塞米松组比:2P< 0.05 , 3P< 0.001
3 讨 论
机体的免疫状态与肝炎的发病、发展及预后有着密切的关系。临床研究证明,慢性肝炎患者非特异性细胞免疫功能低下;在重症肝炎、慢性活动性肝炎、肝炎后肝硬化时细胞免疫功能低于正常的机率尤高,痊愈时则恢复;急性肝炎时,若细胞免疫功能正常,病情恢复较快,反之则较慢,易迁延成慢性肝炎[5] 。安络化纤丸具有养阴益肾、软坚化结、行滞消积、化瘀生新、疏通肝血流,促进肝细胞再生,抗肝纤维化等功效,而实验证明本品能增强正常小鼠和免疫状态低下小鼠的吞噬功能,促进血清溶血素的生成和脾脏T 淋巴细胞的增殖。显示,安络化纤丸在保护动物化学性肝损伤的同时,亦能增强其非特异性免疫功能、特异性体液和细胞免疫功能,这对慢性肝炎、肝硬化的治疗及预后均有重要的意义。
参考文献
[1 ] 张岫美,张斌,魏欣冰. 安络化纤丸对急慢性肝损伤的保护作用[J ] . 中国生化药物杂志,1999 ,20(1) :27-30.
[2 ] 徐叔云. 药理学实验方法[M] . 第2 版. 北京:人民卫生出版社,1991. 1233-1235.
[3 ] 徐学瑛,李元,许津. 一个改进的体液免疫测定方法——溶血素测定法[J ] . 药学学报,1979 ,14(7) :443.
[4 ] 吴华璞,於传斌,赵明敏,等. 复方肝泰灵对小鼠免疫功能的影响[J ] . 中药新药与临床药理,1997 ,8(2) :88-89.
[5 ] 孙宏训. 肝脏病学[M] . 南京:江苏科学技术出版社,1990. 316-320.
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